Тинкториальные свойства

Морфологические свойства бактерий. Бактерии — микроорганизмы, не имеющие оформленного ядра (прокариоты).

Бактерии имеют разнообразную форму и довольно сложную структуру, определяющую многообразие их функциональной дея-тельности.

Для бактерий характерны четыре основные формы: сферическая (шаровидная), цилиндрическая (палочковидная), извитая и нитевидная. Бактерии шаровидной формы — кокки — в зависимости от плоскости деления и расположения относительно друг друга отдельных особей подразделяются на микрококки (отдельно лежащие кокки), диплококки (парные кокки), стрептококки (цепочки кокков), стафилококки (имеющие вид виноградных гроздьев), тетракокки (образования из четырех кокков) и сарцины (пакеты из 8 или 16 кокков).

Палочковидные бактерии располагаются в виде одиночных клеток, дипло- или стрептобактерий. Извитые формы бактерий — вибрионы и спириллы, а также спирохеты. Вибрионы имеют вид слегка изогнутых палочек, спириллы — извитую форму с несколькими спиральными завитками. Размеры бактерий колеблются от 0,1 до 10 мкм. В состав бактериальной клетки входят капсула, клеточная стенка, цитоплаз-матическая мембрана и цитоплазма, в которой содержатся нук-леоид, рибосомы и включения.

Некоторые бактерии снабжены жгутиками и ворсинками. Ряд бактерий образуют споры, которые располагаются терминально, субтерминально или центрально; превышая поперечный размер клетки, споры придают ей веретенообразную форму. Методы окраски. Окраску мазка производят простыми или сложными методами. Простые за-ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последовательное использование нескольких красителей и имеют дифференциально-диагностическое значение.

Отношение микроорганизмов к красителям расценивают как тинкториальные свойства. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений. При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, используя красители анилинового ряда (основные или кислые). Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромофор — анион, то краситель имеет кислые свойства.

ТИНКТОРИАЛЬНые СВОЙСТВА БАКТЕРИЙ

Кислые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Основные красители — генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин.

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят насыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спиртовые, которые и служат для окрашивания микробных клеток.

Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время. Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе.

Если мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены. Сложные методы окраски применяют для изучения структуры клетки и дифференциации микроорганизмов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсионной системе. Последовательно нанести на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

Дата публикования: 2015-11-01; Прочитано: 248 | Нарушение авторского права страницы

studopedia.org — Студопедия.Орг — 2014-2018 год.(0.001 с)…

Тинкториальные свойства бактерий. Методы окраски.

Тинкториальные свойства – отношение микроорганизмов к красителям.

Окраску мазка производят просты­ми или сложными методами. Простые за­ключаются в окраске препарата одним красителем; сложные методы (по Граму, Цилю — Нильсену и др.) включают последо­вательное использование нескольких красителей и имеют диффе­ренциально-диагностическое значение. Существуют специальные методы окраски, которые используют для выявления жгутиков, клеточной стенки, нуклеоида и разных цитоплазматических включений.

При простых методах мазок окрашивают каким-либо одним красителем, ис­пользуя красители анилинового ряда (основные или кис­лые).

Если красящий ион (хромофор) — катион, то краситель обладает основными свойствами, если хромо­фор — анион, то краситель имеет кислые свойства. Кис­лые красители — эритрозин, кислый фуксин, эозин. Ос­новные красители — генциановый фиолетовый, кристал­лический фиолетовый, метиленовый синий, основной фуксин.

Преимущественно для окраски микроорганизмов используют основные красители, которые более интенсивно связываются кислыми компонентами клетки. Из сухих красителей, продающихся в виде порошков, готовят на­сыщенные спиртовые растворы, а из них — водно-спирто­вые, которые и служат для окрашивания микробных кле­ток. Микроорганизмы окрашивают, наливая краситель на поверхность мазка на определенное время.

Окраску основным фуксином ведут в течение 2 мин, метиленовым синим — 5—7 мин. Затем мазок промывают водой до тех пор, пока стекающие струи воды не станут бесцветными, высушивают осторожным промоканием фильтровальной бумагой и микроскопируют в иммерсионной системе.

Тинкториальные свойства

Ес­ли мазок правильно окрашен и промыт, то поле зрения совершенно прозрачно, а клетки интенсивно окрашены.

Сложные методы окраски применяют для изуче­ния структуры клетки и дифференциации микроорганиз­мов. Окрашенные мазки микроскопируют в иммерсион­ной системе.

Последовательно нанести на препа­рат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы, спирты, кислоту и др.

Существуют несколько основных окрасок: по Граму, по Цилю-Нельсону, по Ауески, Нейссера, Бури-Гинса.

2.Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение. Реакция агглютинации — простая по постановке реакция, при которой происходит связыва­ние антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов).

Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изо­тонического раствора натрия хлорида.

Применяются различные варианты реакции агглютинации: развернутая, ориентировоч­ная, непрямая и др.

Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осад­ка (клетки, «склеенные» антителами, име ющими два или более антигенсвязывающих центра — рис. 13.1). РА используют для:

1)определения антител в сыворотке крови боль­ных, например, при бруцеллезе (реакции Райта, Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реак­ция Видаля) и других инфекционных болезнях;

2 определения возбудителя, выделенного от больного;

3)определения групп крови с использова­нием моноклональных антител против алло-антигенов эритроцитов.

Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации:к разве­дениям сыворотки крови больного добавля­ют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и через несколько часов инкубации при 37 ˚С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т.

е. образовался осадок. Характер и скорость агглютинации зави­сят от вида антигена и антител. Примером являются особенности взаимодействия диагностикумов (О- и H-антигенов) со специ­фическими антителами. Реакция агглютина­ции с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие термостабильный О-антиген) происходит в виде мелкозернис­той агглютинации.

Реакция агглютинации с Н-диагностикумом (бактерии, убитые фор­малином, сохранившие термолабильный жгу­тиковый Н-антиген) — крупнохлопчатая и протекает быстрее.

Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентиро­вочную реакцию агглютинации,применяя диа­гностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование возбудителя.

Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле. К капле диа­гностической агглютинирующей сыворотки в разведении 1:10 или 1:20 добавляют чистую культуру возбудителя, выделенного от больно­го.

Рядом ставят контроль: вместо сыворотки наносят каплю раствора натрия хлорида. При появлении в капле с сывороткой и микроба­ми хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации в пробирках с увели­чивающимися разведениями агглютинирую­щей сыворотки, к которым добавляют по 2—3 капли взвеси возбудителя. Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости. Реакцию считают положительной, если агглютинация отмеча­ется в разведении, близком к титру диагнос­тической сыворотки.

Одновременно учитыва­ют контроли: сыворотка, разведенная изото­ническим раствором натрия хлорида, должна быть прозрачной, взвесь микробов в том же растворе — равномерно мутной, без осадка. Разные родственные бактерии могут агглю­тинироваться одной и той же диагностической агглютинирующей сывороткой, что затрудня­ет их идентификацию. Поэтому пользуются адсорбированными агглютинирующими сыво­ротками, из которых удалены перекрестно реагирующие антитела путем адсорбции их родственными бактериями. В таких сыво­ротках сохраняются антитела, специфичные только к данной бактерии.

3.Возбудитель дифтерии.

Таксономия и характеристика. Условно-патогенные коринебактерии. Микробиологическая диагностика. Выявление антитоксического иммунитета. Специфическая профилактика и лечение.Дифтерия – инфекционная болезнь, вызываемая Corynebacterium diphtheriae, характеризующаяся фибринозным воспалением в зеве, гортани, трахее, реже в других органах и явлениями интоксикации.

Возбудитель дифтерии был открыт в 1883.1884 гг. Т. Клебсом и Ф. Леффлером.Таксономия. Corynebacterium diphtheriae относится к отделу Firmicutes, роду Corynebacterium.Морфология и тинкториальные свойства. Возбудитель дифтерии характеризуется полиморфизмом – наряду с наиболее распространенными тонкими, слегка изогнутыми палочками длиной 1-5 мкм встречаются кокковидные и ветвящиеся формы.

Располагаются бактерии нередко под углом друг к другу. Они не образуют спор, не имеют жгутиков, у многих штаммов выявляют микрокапсулу. Характерной особенностью С. diphtheriae является наличие на концах палочки зерен волютина, что обусловливает неравномерное окрашивание клеток анилиновыми красителями.

Грамположителен.

Культивирование. С. diphtheriae – факультативный анаэроб, оптимальная температура для роста 37ºС, рН среды – 7,6. Растет на специальных питательных средах (в частности, на элективной среде – свернутой сыворотке); на среде Клауберга, содержащей кровь и теллурит калия, образует колонии трех типов: крупные серые с неровными краями, радиальной исчерченностью, напоминающие маргаритки; мелкие черные, выпуклые с ровными краями; колонии, похожие на колонии обоих типов.В зависимости от культуральных и ферментативных свойств различают 3 биологических варианта С.

diphtheriae: gravis, mitis и intermedius. Ферментативная активность. Биохимическая активность возбудителя дифтерии достаточно высока. Наряду с другими ферментами он обладает цистиназой, которая отсутствует у других кори небактерий.

Биовар gravis ферментирует крахмал и гликоген в отличие от биовара mitis. Антигенная структура. На основании строения О- и К-ан-тигенов различают 11 сероваров возбудителя дифтерии. Факторы патогенности. Основным фактором патогенности является экзотоксин, поражающий мышцу сердца, надпочечники, почки, нервные ганглии.

Способность вырабатывать токсин связана с наличием в клетке профага, несущего ген tox+, ответственный за образование токсина V, M. раздел 3.7). Кроме того, С. diphtheriae продуцирует ферменты агрессии – гиалуронидазу, нейраминидазу, корд-фактор.

Резистентность. Дифтерийная палочка устойчива к высушиванию, действию низких температур. Может сохраняться на детских игрушках до 15 дней, в воде – 6-20 дней. Восприимчивость животных. Модели для культивирования С.

di phtheriae нет, однако к токсину чувствительны морские свинки, кролики и другие животные. Условно-патогенные коринебактерии. К роду Corynebacterium, помимо возбудителя дифтерии, относятся другие виды, способные при определенных условиях вызывать гнойно-воспалительные заболевания – C.pseudodiphtheriticum (hofTmanii), С. xerosis и т. д. Эти бактерии обитают там же, где и возбудители дифтерии, – в зеве, на конъюнктиве, коже. Эпидемиология. Источник инфекции – больные люди и носители.

Основной путь передачи инфекции – воздушно-капельный, но возможен и контактно-бытовой – через белье, посуду, игрушки. Восприимчивость к дифтерии высокая, наиболее чувствительны к возбудителю дети, однако в последние годы наблюдается «повзросление» болезни. Заболевание чаще встречается осенью.

Патогенез. Входные ворота инфекции – слизистые оболочки .~ ..».а питательных путей и т. д. На месте входных ворот наблюдается фибринозное воспаление, образуется характерная дифтерическая пленка, которая с трудом отделяется от подлежащих тканей.

Экзотоксин, выделяемый бактериями, попадает в кровь, в результате чего развивается токсинемия. Токсин поражает миокард, почки, надпочечники, нервную систему. Клиническая картина. Существуют разнообразные по локализации формы дифтерии: дифтерия зева, носа, гортани, глаз, наружных половых органов, кожи, ран и др. В 85-90 % случаев наблюдается дифтерия зева. Инкубационный период – от 2 до 10 дней. Заболевание начинается с повышения температуры тела, появления боли при глотании, пленки на миндалинах, увеличения лимфатических узлов.

У взрослых дифтерия может протекать как лакунарная ангина. У детей раннего возраста нередко одновременно с зевом и носом в патологический процесс вовлекается гортань, и в результате отека гортани развивается дифтерийный круп, который может привести к асфиксии и смерти. Другие тяжелые осложнения, которые также могут явиться причиной смерти, – токсический миокардит, острая недостаточность гипофизарно-надпочеч-никовой системы, паралич дыхательных мышц.

Иммунитет. После перенесенного заболевания вырабатывается стойкий иммунитет. Достаточно продолжительным является поствакцинальный иммунитет (до 3-5 лет). Выявляют наличие антитоксических антител с помощью РПГА. Микробиологическая диагностика. Для бактериологической диагностики дифтерии берут материал из зева и носа. Для постановки предварительного диагноза возможно применение

бактериоскопического метода.

Основной метод – бактериологический. В процессе идентификации выделенной чистой культуры С. diphtheriae дифференцируют от других коринебактерий. Внутривидовая идентификация заключается в определении биовара, что имеет только эпидемическое значение.

Лечение. Основной метод лечения – немедленное введение антитоксической противодифтерийной сыворотки. Проводят также антибиотикотерапию. Профилактика. Специфическая профилактика заключается во введении грудным детям, начиная с трехмесячного возраста (до этого времени у них сохраняется плацентарный иммунитет), дифтерийного анатоксина, входящего в состав препаратов АКДС (адсорбированной коклюшно-дифтерийно-столбнячной вакцины), АДС (адсорбированного дифтерийно-столбнячного анатоксина).

Ревакцинацию производят с помощью АДС-анатоксина не только в детском возрасте, но и взрослым людям каждые 10 лет. При контакте с больным человеком людям, не имеющим напряженного антитоксического иммунитета, вводят дифтерийный анатоксин (АД). Помимо данных препаратов, выпускают АКДС-М, АДС-М, АД-М – анатоксины, содержащие малое количество антигена и используемые для иммунизации людей с предрасположенностью к аллергии, однако эти препараты являются менее иммуногенными.

№ 13



Образование

Тинкториальные свойства — основа микроскопирования бактерий

9 марта 2018

Многообразие бактериальных инфекций требует четкой идентификации возбудителя и определения его видовой принадлежности. Определить тип микроорганизма микробиологам помогают его тинкториальные свойства — восприимчивость микроба к окрашиванию различными красителями.

Этот способ позволяет исследовать морфологию возбудителя. Тинкториальные свойства бактерий имеют большое значение для практических и теоретических исследований в области микробиологии.

Исследование микробов

В бактериологии существует много методов окрашивания микроорганизмов. Все они основаны на тинкториальных свойствах бактерий.

Окрашивание позволяет определить их форму, строение, размер, взаимное расположение. Это позволяет решать проблемы систематизирования видов микроорганизмов общей биологии и сравнительной микробиологии.

Зачем их красить

Бактерии – это практически прозрачные организмы, и без применения окрашивания они плохо видны для обычной микроскопии. Можно использовать специальные виды микроскопии (фазово-контрастную, в темном поле) для изучения объектов, но наиболее простым способом является окрашивание, после которого бактерии становятся видны в обычный световой микроскоп.

Видео по теме

Подготовка образца

Вне зависимости от применяемой методики окрашивания, существуют единые правила подготовки исследуемого объекта.

Обязательными являются следующие стадии:

  • Стерильными инструментами делается мазок на предметное стекло.
  • Образец подсушивается.

    Морфология бактерий. Тинкториальные свойства бактерий.

    Это делается при комнатной температуре либо с использованием сушильных шкафов.

  • Далее следует стадия фиксации – специальными составами микроорганизмы прикрепляются к стеклу.
  • Собственно окрашивание – образец покрывается красителем на фиксированный период времени, после чего его смывают.
  • Окончательная сушка – образец снова высушивается.

Самые распространенные красители

Чаще всего используются красители на основе анилина с разными значениями кислотных показателей (рН).

Большинство красителей – порошки, которые разводят в спирте.

Красители, в которых красящими агентами являются катионы, называются основными (рН больше 7). С их помощью можно окрасить микроорганизмы в красный (фуксин, сафранин), фиолетовый (метилвиолет, тионин), синий (метиленовая синь), зеленый (малахитовая зелень), коричневый (хризоидин) и черный (индулин) цвета.

Красители, в которых красящими агентами являются анионы, называются кислотными (рН меньше 7).

Они покрасят образец в красный (эозин), желтый (пикрин) или черный (нигрозин) цвета.

Есть группа нейтральных красителей (например, родамин В), где красящими агентами выступают и катионы, и анионы.

Культура живая или мертвая

Методы окрашивания делятся на две группы в соответствии с жизненной формой исследуемого образца.

  • Витальное (прижизненное) окрашивание. Этот метод исследования свойств микроорганизмов используется при изучении живых тканей, что позволяет наблюдать за процессами жизнедеятельности микробов.

    Для такого окрашивания используются красители с низкой токсичностью и высокой проникающей способностью.

  • Поствитальное окрашивание. Это окрашивание мертвых или умерщвленных микроорганизмов. Благодаря тинкториальным свойствам бактерий, микробиологи определяют их структуру.

    Именно такое окрашивание применяется наиболее широко.

Грамположительные и грамотрицательные

Именно такие характеристики бактерий можно встретить в инструкциях к различным медицинским препаратам.

Этот способ изучения тинкториальных свойств бактерий основан на использовании генциантового фиолетового красителя и фиксации йодом. Это методика Ганса Кристиана Грама, датского врача, который предложил ее в 1884 году. В результате такого окрашивания бактерии делятся на две группы:

  • Грам (+) – окрашиваются в синий цвет (стафилококки и стрептококки).
  • Грам (-) – окрашиваются в цвет от розового до красного (энтеробактерии, сальмонеллы, кишечные палочки).

Различный результат окрашивания получается из-за неодинаковых тинкториальных свойств стенок бактерий.

Метод окраски Грама и сегодня является основным при диагностике некоторых инфекционных болезней.

Другие методики окрашивания

Дадим характеристику еще нескольким методикам, широко применяемым в бактериологии.

  • Метод Циля-Нельсона – определяет кислотную устойчивость бактерий. По ней выявляют возбудителей туберкулеза и микобактериоза.
  • Методика Романовского-Гимзе – окрашивает ацидофильные (уксуснокислые и молочнокислые) бактерии в красный, а базофильные (спирохеты и простейшие) – в синий цвет.
  • Методика Морозова – окрашивает бактерии в коричневый цвет и делает видимыми их жгутики.

Можно увидеть споры

Окрашивание фукцином Циля позволяет увидеть споры бактерий.

Имея после окрашивания розовый цвет, они хорошо видны на фоне голубых бактерий. Этот метод также является инструментом бактериологии и имеет большое практическое значение.

Комментарии

Похожие материалы

Образование
Тинкториальные свойства — это что такое?

Прежде чем исследовать микроорганизмы под микроскопом, изучаемый образец подвергают специальной подготовке.

В естественном виде практически все бактерии прозрачны, поэтому их окрашивают красителями. Окрашивание позвол…

Бизнес
Дюраль — это высокопрочный сплав на основе алюминия с добавками меди, магния и марганца: свойства, производство и применение

Дюраль – это многокомпонентный сплав, который изготавливают из алюминия, магния, цинка и марганца.

В процессе производства в смесь добавляют и другие компоненты.

Здоровье
Липа: полезные свойства и противопоказания к использованию средств на ее основе

Липа – это замечательное лекарство от многих недугов, посланное самой природой. Её жёлтые цветы с приятным сильным ароматом – настоящий кладезь здоровья. Однако не все знают, как лучше собирать эти дары пр…

Здоровье
Бактерии и вирусы — основа микромира

Согласно К. Везе, все живые существа разделены на несколько доменов. Их существует три: бактерии, археи и эукариоты. Вирусы рассматриваются как безранговая категория. Дело в том, что не все ученые относят данную групп…

Здоровье
Пшеничная каша. Полезные свойства продукта на основе разных круп

Первой из каш, которую человечество попробовало в глубокой древности, несомненно, была пшеничная.

Даже в библейских источниках этот продукт упоминается неоднократно. Вкусовые качества делают пшеницу важной «перс…

Новости и общество
Полынь. Полезные свойства и рецепты на ее основе

Каждое лето в полях и городской черте можно встретить высокое растение с незабываемым горьковатым запахом. Обыкновенная полынь знакома многим — на просторах нашей Родины ее встречается более ста разновидносей, отличаю…

Образование
Культуральные свойства бактерий: определение, описание, особенности и функции

Микробиология – обширная современная наука, изучающая биохимические и физические свойства, морфологию и систематику бактерий.

Мир прокариот богат огромным количеством различных видов. Чтобы исследовать все парам…

Образование
Загадки, в основе которых описание свойств, признаков. Описания-загадки для детей

С загадками знаком каждый. Эта малая форма народного творчества дает необ…

Образование
Основы химии: свойства, применение и получение азота

Азот является одним из самых распространенных на Земле элементов – в атмосфере его содержание превышает 78%.

Существование такого большого количества азота в свободном состоянии говорит о его инертности и трудно…

Бизнес
Цирконий: сплавы на его основе. Свойства, применение

Редкий, но при этом очень важный во многих отраслях металл – цирконий — был впервые выделен только в 1824 году. При этом он все же содержал некоторый процент других элементов. Только в 20-м столетии удалось полу…

Вам также может понравиться

Об авторе admin

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *